FRET peptide ቴክኖሎጂ

Fluorescence resonance energy transfer (FRET)

Fluorescence resonance energy transfer (FRET) ለጋሹ የተደሰተ የመንግስት ሃይል በ intermolecular የኤሌክትሪክ ጥንዶች መስተጋብር ወደ ተቀባይ ሁኔታ የሚሸጋገርበት የጨረር ያልሆነ የኃይል ማስተላለፊያ ሂደት ነው።ይህ ሂደት ፎቶን (ፎቶኖችን) አያካትትም, ስለዚህም ራዲየቲቭ አይደለም.ይህ ትንታኔ ፈጣን፣ ስሜታዊ እና ቀላል የመሆን ጥቅሞች አሉት።

በ FRET ምርመራ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው ቀለም ተመሳሳይ ሊሆን ይችላል.ነገር ግን በአብዛኛዎቹ አፕሊኬሽኖች ውስጥ, የተለያዩ ማቅለሚያዎች በትክክል ጥቅም ላይ ይውላሉ.በአጭር አነጋገር የብርሃን ድምጽ-አመጣጣኝ ሃይል ማስተላለፍ ከለጋሹ (ቀለም 1) ወደ ተቀባይ (ቀለም 2) ለጋሹ ቡድን በሚደሰትበት ጊዜ ጥንድ ዲፕሎሎች ማስተላለፍ ነው.በአጠቃላይ ለጋሽ fluorophore ቡድን የሚለቀቀው ልቀት ከተቀባዩ ቡድን የመምጠጥ ስፔክትረም ጋር ይደራረባል።"በሁለቱ ፍሎሮፎሮች መካከል ያለው ርቀት ተስማሚ በሚሆንበት ጊዜ (10 - 100 A), የፍሎሮፎር ኃይልን ከለጋሽ ወደ ተቀባይ ማስተላለፍ ሊታይ ይችላል."የኃይል ማስተላለፊያ ዘዴው በተቀባዩ ኬሚካላዊ መዋቅር ላይ የተመሰረተ ነው.

1. ወደ ሞለኪውላዊ ንዝረት ይቀየራል፣ ማለትም፣ የብርሀን የኃይል ማስተላለፊያ ብርሃን ይጠፋል።(ተቀባዩ ብርሃን ማጥፋት ነው)

2. ልቀቱ ከተቀባዩ ራሱ የበለጠ ኃይለኛ ስለሆነ በሁለተኛ ደረጃ የፍሎረሰንት ስፔክትረም ላይ ቀይ ለውጥ ያስከትላል።(ተቀባዮች ብርሃን ሰጪዎች ናቸው)።

የለጋሾች ቡድን (ኢዲኤንኤስ) እና ተቀባይ ጂን (DABCYL) ከኤችአይቪ ፕሮቲን የተፈጥሮ ንጥረ ነገር ጋር አንድ ወጥ በሆነ መልኩ የተሳሰሩ ናቸው፣ እና ንብረቱ ካልተቋረጠ DABCYL EDANSን ያጠፋና ከዚያም ወደ ፍሎራይን የማይታወቅ ይሆናል።የኤችአይቪ-1 ፕሮቲኤዝ ግንኙነት ከተቋረጠ በኋላ፣ EDANS በDABCYL አይጠፋም፣ እና EDANS luciferases በኋላም ሊታወቅ ይችላል።የፕሮቲንቢን መከላከያዎች መገኘት በ EDNS የፍሎረሰንት መጠን ላይ በሚደረጉ ለውጦች ቁጥጥር ሊደረግበት ይችላል.

FRET peptides peptidase nonspecificity ለማጥናት ምቹ መሳሪያዎች ናቸው።የእሱ ምላሽ ሂደት በተከታታይ ቁጥጥር ሊደረግበት ስለሚችል, የኢንዛይም እንቅስቃሴን ለመለየት ምቹ ዘዴን ይሰጣል.በለጋሹ/ተቀባይ የፔፕታይድ ቦንዶች ሃይድሮላይዜሽን በኋላ የሚፈጠረው ሼን በናኖሞላር ክምችት ላይ የኢንዛይም እንቅስቃሴን መጠን ያሳያል።የ FRET peptide ሳይበላሽ ሲቀር፣ የውስጣዊ ብልጭታ ድንገተኛ መጥፋት ያሳያል፣ነገር ግን ከለጋሽ/ተቀባይ ተቃራኒ የሆነ ማንኛውም የፔፕታይድ ቦንድ ሲሰበር ብልጭታ ይለቃል፣ይህም ያለማቋረጥ ሊታወቅ የሚችል እና የኢንዛይም እንቅስቃሴው ሊለካ ይችላል።